Isolamento di Bdellovibrio ed organismi simili (BALOS) e valutazione della capacità predatoria su ceppi batterici patogeni per i pesci

Descritti per la prima volta nel 1963 come risultato di alcuni esperimenti che si prefiggevanodi isolare Batteriofagi, i BALOs (Bdellovibrio and like organisms) sono predatori procariotidi piccole dimensioni (0.25-0.40 μm in diametro,0.5-2 μm in lunghezza), morfologicamentesimili ad una virgola, mobili per la presenza di un flagello peritrico, in grado di crescere nellospazio periplasmico di un microrganismo Gram negativo.Il tipico ciclo biologico di un BALOs si compone di varie fasi di sviluppo (attacco,penetrazione, accrescimento, lisi ) che portano alla distruzione del procariote parassitato .I BALOs sono variamente diffusi in natura. Sono stati rinvenuti nel suolo (associati alleradici delle piante ad al terreno), nell‟acqua (dolce e di mare) ed in superfici abiotiche ebiotiche di varia tipologia (branchie di crostacei, conchiglie di molluschi bivalvi e trattointestinale di alcuni mammiferi e volatili) .In considerazione della loro attività predatoria, i BALOs sono stati proposti come agenti dicontrollo biologico in sistemi organici quali piante, animali e prodotti derivati, uomo edinorganici come acqua o superfici a contatto con alimenti.Scopo del presente lavoro è stato quello di ampliare le conoscenze relative alla diffusione edallo spettro d‟ospite di alcuni ceppi di BALOs testando la loro capacità di predare germiGram negativi patogeni per alcune specie ittiche.Per l‟isolamento dei BALOs sono stati impiegati campioni di acqua di fiume, acqua di mare,scarificati di conchiglia ed omogenato di polpa delle seguenti specie di molluschi: Tapesphilippinarum, Crassostrea gigas, Mytilus galloprovincialis, Chamelea gallina.I campioni sono stati seminati impegando come batteri ospite Salmonella sp., Vibrioalginolyticus e Escherichia coli mediante tecnica del doppio strato di agar e utilizzando duedifferenti terreni (YPA e pP20) al fine di valutare quale presentasse le migliori caratteristichein termini di tempi di crescita. Nelle fasi successive i ceppi di BALOs isolati sono statimantenuti in brodo YP procedendo inoltre all‟osservazione degli stessi in microscopia otticaa contrasto di fase ed elettronica a trasmissione (TEM).I BALOs isolati sono stati in seguito seminati in terreno YPA utilizzando stipiti battericiGram negativi patogeni per i pesci quali: Yersinia ruckeri (n=4), Vibrio anguillarum (n=4) eAeromonas salmonicida (n=1).Al termine della sperimentazione sono stati isolati 8 ceppi di BALOs provenientiesclusivamente dai campioni di acqua dolce constatando che l‟isolamento, in termini di tempidi crescita, avveniva più rapidamente su terreno YPA.L‟analisi dei ceppi in microscopia ottica ed elettronica ha permesso di caratterizzare alcunefasi del ciclo vitale dei BALOs isolati.In merito alla sperimentazione del potere antibatterico nei confronti dei ceppi utilizzati, sonorisultati suscettibili di predazione un ceppo di Yersinia ruckeri e 2 ceppi di Vibrioanguillarum.Considerando quindi l‟accertata innocuità dei BALOs per gli organismi superiori, il presentestudio rende auspicabile un ulteriori approfondimento per il loro impiego applicativo comeagenti antibatterici biologici.[...]